circrna是目前生命科学领域新兴的研究热点分子之一。区别于传统的线性rna，circrna具有独特的闭合环状结构，使得其对核酸酶不敏感，所以比线性rna更为稳定，非常适合作为临床诊断标志物（biomarker）。近期研究表明，circrna主要通过吸附mirna抑制后者对相应靶基因的调控，称之为竞争性内源rna（cerna），而与疾病相关联mirna的相互作用说明circrna对疾病的调控起着非常重要的功能。
aksomics（原康成生物）为您提供一站式的circrna实时定量pcr技术服务，您只需要提供保存完好的组织或细胞样本，本公司专业技术服务人员就可为您完成circrna实时定量pcr实验操作和数据分析，提供您完整的实验报告，为你节省大量的时间和精力。
1. 独特的引物设计
由于circrna独特的闭合环状结构，在进行实时定量pcr检测的时候需要更为特异的引物设计；针对circrna特异的back splicing site，引物设计在该位点两侧（如下图），即“外向引物”（区别于线性rna的内向引物）。
2. 样品rna抽提
a.组织样本：取适量（50-100mg）新鲜组织或正确保存的组织样本，匀浆后用trizol试剂抽提rna。
b.细胞样本：取1×106-1×107细胞，pbs清洗细胞，吸去pbs后用trizol试剂抽提rna。
3. rna质量检测
a.紫外线吸收测定法测定rna在波长260nm和280nm的吸收值，获得rna的浓度及并通过 a260/a230及a260/a280的吸收比值判定rna的纯度；
b.甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测rna的完整性。
4. 逆转录合成cdna
利用random primer进行rt反应，合成cdna。
5. 实时定量pcr
以合成的cdna作为模版进行实时定量pcr扩增；同时检测每个样本中内参基因的表达量，校正上样误差。
6. 分析结果、提供实验报告
分析实时定量pcr结果，提供实验报告，包括详细的实验方法、实时定量pcr实验数据和图表。
