thermo scientifictm公司的tmt (tandem mass tag)标记定量技术和ab sciextm公司的itraq技术都属于二级报告离子定量技术,具有相似的原理(图1):提取样品中的总蛋白并酶解为多肽,多肽n-term以及末端lysine侧链基团的游离氨基能够与tmt标签进行共价结合,从而使每条多肽都带上至少一个tmt标签;不同tmt标签具有相同的分子量,但是却有不同的同位素分布,来自不同样品的相同多肽在ms1中同时被分离,经裂解后在ms2中释放出reporter,代表该多肽在对应样品中的相对含量。tmt (itraq)最高可同时标记16 (12)组不同的生物样品,且一次性完成全部样品的定性定量分析,显著的提高了实验通量,降低了定量误差,可发现更细微的生物学差异。
图1. tmt标签结构和定量原理。
●通量与深度的完美结合:
在质谱本身高通量的基础上,tmt技术又进一步扩大了这种优势,相比silac、dimethyl等标记定量技术,tmt可同时完成多至10个不同样品的定量分析;运用high ph反相hplc分级为8个组分,每个组分再经low ph反相hplc分离,两次正交液相分离,显著的提高了鉴定和定量深度。
●特异性与灵敏度兼备:
基于质谱的蛋白质组学精确到单个氨基酸位点,蛋白鉴定准确,灵敏度高,是profiling分析和ptm研究的强大工具。
●严格的质量控制:
数据稳定、重现性好,定量动态范围广,多个样品平行处理极大的降低了实验误差。
●专业的数据分析:
标准的搜库流程,专业的统计和生信分析,出版级的图表展示,完整全面的分析报告。
●疾病标志物筛选
●分子机制研究
●药物作用靶点研究
●特殊功能蛋白质筛选
thermo scientific easy-nlc 1200
thermo scientific q exactive
样品类型 | 样品要求 |
---|---|
蛋白质提取物 | 浓度 >1μg/μl,蛋白质总量 >200μg |
细胞样品 | 细胞量 >5×106 |
组织样品 | 动物、微生物组织湿重 >100mg |
体液样品 | 血液体积 >500μl,血清、血浆、脑脊液>500μl,尿液>50ml |