客户成果丨circakt3通过mir-296-3p调控e-cadherin 抑制肾透明细胞癌转移

浙江大学医学院附属邵逸夫医院李恭会课题组发表了题为“circ-akt3 inhibits clear cell renal cell carcinoma metastasis via altering mir-296-3p/e-cadherin signals.”的文章。该研究应用arraystar circrna芯片发现并锁定了一个在肾透明细胞癌(ccrcc)中显著下调的环状rna circ-akt3。敲低circ-akt3能促进了ccrcc的迁移和侵袭,而circ-akt3的过表达则抑制ccrcc的转移。此外,circ-akt3通过circ-akt3 / mir-296-3p / e-cadherin的作用轴抑制ccrcc转移。因此,circ-akt3可以作为一种更好地抑制ccrcc转移新型疗法靶标。该研究成果发表在学术期刊molecular cancerif: 10.679)(芯片实验由康成生物提供技术服务)。


研究背景

肾细胞癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,大约60-70% 的肾细胞癌为肾透明细胞癌。肾癌转移是预后不良的重要原因,有证据表明上皮间质转化(emt)过程增加癌细胞的迁移和侵袭,而肾透明细胞癌中emt的小分子及circrna调控网络机制仍不清楚。因此,深入了解mirna 及circrna 调节因子对转移进程的影响,可能有助于阐明 ccrcc 的发病机制。

技术路线


研究思路

作者应用arraystar human circrna芯片分析3对与癌旁正常组织配对的 ccrcc 组织样本,发现53个 circrnas 在 ccrcc 组织显著上调,30个 circrnas 显著下调。挑选差异前十的circrna进行pcr验证,circ-akt3在癌样本显著下调,与芯片趋势一致。进一步验证,ccrcc 组织和细胞系中的 circ-akt3减少,并可能与确诊时的恶性程度呈负相关。

在细胞系中敲低或者过表达circ-akt3,发现其通过抑制 ccrcc 细胞的迁移和侵袭而发挥保护作用。 检测与肿瘤细胞转移相关的基因,发现e-cadherin表达受到circ-akt3的调控,且表达正相关。 利用在线生物信息学数据库(targetscan 和 miranda) ,筛选4个circ-akt3 和 e-cadherin 共同结合的mirna。

rna pull down, ago-rip等实验验证circ-akt3竞争性结合mir-296-3p。肾癌细胞中进行transwell功能回复实验,mir-296-3p 过表达显著抑制e-cadherin的表达促进了 osrc-2细胞的迁移和侵袭,可以通过过表达 circ-akt3来挽救。荧光素酶报告载体构建 circ-akt3的野生型和突变型序列,分析mirna的结合位点。小鼠体内过表达circ-akt3上调e-cadherin,有效地抑制了 ccrcc 的转移。

结果展示

图一:arraystar circrna芯片结果展示a.散点图;b.聚类图


图二:a.circakt3促进细胞迁徙及侵袭; b. e-cadherin在癌症样本中下调; c. ago rip 验证circrna 与mir-296-3p结合


图三:a. 回复实验验证circrna与mirna的调控; b. 小鼠实验验证circakt3的功能


图四:circ-akt3调控模式图

研究意义

本研究通过arraystar human circrna芯片发现了一个新的来源于 akt3基因位点的 circrna,命名为 circ-akt3,在 ccrcc 组织样本和细胞系中稳定下调。 功能检测表明,cox-3与 ccrcc 细胞的转移呈负相关。机制研究表明,circ-akt3可能作为 mir-296-3p 的海绵,上调 e-cadherin 的表达,从而抑制 ccrcc 的体外迁移和侵袭以及体内转移,可作为肿瘤转移抑制的治疗靶点。


原文出处

circ-akt3 inhibits clear cell renal cell carcinoma metastasis via altering mir-296-3p/e-cadherin signals. mol cancer. 2019


相关技术服务:

arraystar 环状rna芯片技术服务

环状rna 实时定量pcr技术服务