exiqon mircury lna™ universal rt microrna pcr芯片检测平台,基于lna™专利技术,采用独特的universal rt反应,实现对microrna的准确定量检测,即使在总rna含量较低的样本,如ffpe和血清/血浆中,也可以获得高质量的microrna检测结果。
康成生物为您提供exiqon公司mircury lnatmuniversal rt microrna pcr芯片——microrna实时定量pcr芯片技术服务,全部实验皆使用进口试剂完成,使用的定量pcr仪器为美国应用生物系统公司生产的荧光定量pcr仪abi prism® 7700或abi prism® 7900。pcr芯片技术服务的主要流程包括:rna抽提、rna质量检测、cdna模板制备、实时定量pcr、数据处理及制作实验报告。
exiqon mircury lna™ universal rt microrna pcr芯片列表
芯片名称
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规格
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物种
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描述
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microrna ready-to-use pcr, human panel
i
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384 well
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人
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372个常见的人类mirna
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microrna ready-to-use pcr, human panel
i ii
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384 well
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人
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752 个人类mirna
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microrna ready-to-use pcr, mouse&rat
panel i
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384 well
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小鼠,大鼠
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372个常见的小鼠/大鼠mirna
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microrna ready-to-use pcr, mouse&rat
panel i ii
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384 well
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小鼠,大鼠
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752 个小鼠/大鼠mirna
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cancer focus microrna pcr
panel
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96 well
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人
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84个癌症相关的mirna
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serum/plasma focus microrna pcr
panel
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384 well
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人
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179个在血清、血浆样品中验证过的mirna
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stem cell focus microrna pcr
panel
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96 well
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人
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85个与胚胎干细胞或多能诱导干细胞相关的mirna
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exiqon的lna™专利技术攻破microrna pcr检测的两大难题
*lna™化学修饰提高引物和靶标分子的结合力,提高检测灵敏度,解决microrna引物设计的难点:microrna长度仅22nt左右,相当于一条普通oligo引物的长度,而pcr扩增需要上下游两条引物,因此传统的microrna 的pcr方法仅一条引物为microrna特异性,另一条采用通用引物,检测的特异性降低。 此外,microrna的gc含量分布范围广: 5%-95%,由于a :t配对碱基的结合力要低于g :c配对,此gc含量低于50%的microrna,即使整条序列都被一条普通的oligo引物覆盖,该引物的tm值参数仍然难以达到pcr检测的要求(55-63℃),这个部分的microrna用普通引物是不能得到有效扩增。lna™专利技术能解决microrna研究的难点,包括pcr检测。每个lna™修饰位点能够提高引物tm值3-8℃,因此在相同的pcr反应条件下(引物的tm 值 60℃左右),可以通过加入lna™缩短引物的长度,使得上下游都为microrna特异性引物,pcr的特异性得到双重保障。而且更为重要的是,gc含量低的microrna的pcr问题也能迎刃而解,控制加入lna™的比例(gc含量低的microrna检测引物加入多个lna™修饰的碱基),使所有的microrna都能得到有效的、均一的检测信号。
exiqon mircury lna™ universal rt microrna pcr芯片特点
4.质控严格:每个panel均包含6个内参和2组质控对照;基于sybr green的pcr方法,还可以提供溶解曲线以判断扩增特异性(图4)
5.高重复性:简化实验步骤,减少技术误差,实验重复性好(图5)
2. 基于lna™专利技术的pcr扩增反应:
实现引物tm值均一,并同时保持microrna扩增的高特异性和高灵敏度:
mircury lna™ universal rt microrna pcr芯片中所使用的microrna特异性的pcr引物(pcr扩增上下游引物)都经过lna™优化,并且经过严格的验证,能有效区分序列只差一个碱基的microrna,并能区别成熟microrna和microrna前体,从而保证对靶microrna的特异性扩增;同时,显著降低背景信号,从而增强对低丰度microrna的准确检测。
3. 严格的芯片内参照和质控设置:
mircury lna™ universal rt microrna pcr芯片内设置了6个内参,包括:3个microrna (hsa-mir-103, hsa-mir-191 and hsa-mir-423-5p),3个小rna (u6, snord38b and snord49a)。这些内参在大量实验结果和多种组织的microrna表达分析中均呈现出稳定的表达水平,但研究者也需要根据组织或细胞的实际情况选择最合适的、稳定表达的内参分析试验结果。
同时,芯片内还设置了一个spike-in对照和一组3次重复的芯片间误差校正参照。
1. mircury lna™ universal rt microrna pcr芯片在lcm微量样本microrna表达检测中的应用:
由于mircury lna™ universal rt microrna pcr 芯片要求的样本量较其他平台更少,对于lcm等微量样本尤其适用。(图7)